Protein A/G Magnetic Co-IP/IP Kit

免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）或免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是研究蛋白或蛋白与蛋白间相互作用（Protein-Protein Interactions, PPIs）的常用技术手段，通过使用特异性抗体和可结合抗体的介质（如Protein A/G磁珠等），或直接使用偶联特异性抗体的介质（如琼脂糖凝胶或磁珠），将目标蛋白质从复杂样品中分离出来，后续可用于SDS-PAGE或质谱分析等。

本产品是一款经典磁珠法IP/Co-IP试剂盒，包含高质量的Protein A/G磁珠及经过优化验证的免疫沉淀必要试剂，使IP或Co-IP实验更加简单、便捷和高效。Protein A/G可与用户自备特异性抗体Fc端特异性结合，一定时间孵育后形成Protein A/G磁珠-抗体混合物（beads-Ab complex），然后加入样品，样品可被抗体的Fab端特异性识别而形成Protein A/G磁珠-抗体-抗原免疫复合物（Beads-Ab-Ag complex）。洗涤免疫复合物以去除未结合的蛋白，然后使用酸性洗脱液或SDS-PAGE上样缓冲液等方法从磁珠上洗脱结合的免疫复合物用于后续检测。

Protein A是一种发现于金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的细胞壁表面蛋白，分子量为42 kDa，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白（Immunoglobulin, Ig） Fc区结合，同时也会和人VH3家族的Fab区结合。Protein G是C型或G型链球菌（Streptococcal bacteria）表达的免疫球蛋白结合蛋白，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白（Immunoglobulin, Ig） Fc区结合。本产品为改造过的重组Protein A（25 kDa）与Protein G（25 kDa），与纳米级氨基磁珠共价偶联结合，且仅保留了与IgG等 Fc端结合相关的氨基酸序列，去除了结合位点以外可能导致非特异性结合的序列，从而可以有效减少非特异性结合。

Protein A beads可特异性地结合相应抗体，如human IgG1、IgG2、IgG4，mouse IgG2a、IgG2b及rabbit IgG等，且每个Protein A分子可以结合5个IgG分子，而Protein G beads可结合的抗体为human IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c,以及rabbit、goat多克隆抗体等，且每个Protein G分子可以结合3个IgG分子。Protein A/G beads主要用于免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）、免疫共沉淀（Co-IP）或染色质免疫沉淀（Chromatin Immunoprecipitation, Ch-IP），以及血清、细胞培养上清液或腹水等样品中抗体的纯化等。针对常见的免疫球蛋白亚类的结合能力及不同物种的总结合能力情况见下表（Table 1）。

Protein A/G beads是Protein A beads与Protein G beads按照1:1的比例配置，具有多种显著的使用优势。首先，可实现结合抗体的高含量与结合特异性。与传统的Protein A/G琼脂糖凝胶相比，本产品孔径更小，不易产生非特异性吸附，同时结合量高。1 mL磁珠悬浮液含约10 mg磁珠以及不少于0.6 mg重组Protein A/G，其可结合不少于0.7 mg Human IgG，而具体最大结合量与抗体类型以及靶蛋白等有关。实验时，通常500 μL样品使用10-20 μL Protein A/G beads悬浊液即可进行高效的免疫沉淀实验。其次，可实现抗体或抗体复合物的超快速结合。Protein A/G beads（~200 nm）因其超大比表面积而便于进行磁珠与抗体或抗体复合物的快速有效结合。通常10 min内即可完成抗体或其复合物的吸附过程，30 min内完成目的蛋白免疫沉淀操作。缩短操作时间可以有效避免在长时间操作过程中目的蛋白的降解或变性，充分保证目的蛋白的活性。由于采用磁性分离，每次进行IP和Co-IP相比于琼脂糖凝胶可以节省40%的时间。最后，可使用多样化的方法来洗脱。依据目的蛋白的结构、生物学功能及后续应用的设计要求等因素，可以使用酸性溶液、SDS-PAGE上样缓冲液或竞争性多肽等多种洗脱液进行洗脱。（具体产品参数见Table 2）

Table 1 affinity data for Protein A and Protein G for different sources and subtypes of IgG. ++++ = Strong Binding; ++~+++ = Medium Binding; + = Weak Binding; +/- = Weak or No Binding; - = No Binding.

Table 2 The main related indicators of Protein A/G beads.